細胞復蘇和凍存是細胞培養中常見的操作，主要用于保存和恢復細胞系。以下是一些基本的步驟和注意事項：
### 細胞凍存（Cryopreservation）
1. **細胞準備**：選擇生長狀態良好的細胞，通過胰蛋白酶或EDTA等消化細胞，使其成為單個細胞懸液。
2. **細胞計數**：使用細胞計數器確定細胞密度。
3. **加入凍存液**：將細胞懸液與凍存液按一定比例混合，常用的凍存液含有DMSO或丙三醇等作為保護劑。
4. **分配細胞**：將細胞懸液分配到凍存管中，通常每管的細胞量是1-2mL。
5. **逐步降溫**：
- 短期保存：可以立即將凍存管放入-80°C冰箱或液氮罐中的凍存盒中。
- 長期保存：通常采用程序降溫機進行逐步降溫，以防止細胞內冰晶形成，造成損傷。
6. **儲存**：將凍存管存放在液氮罐中，溫度約為-196°C。
### 細胞復蘇（Thawing）
1. **準備**：從液氮罐中取出所需的凍存管，快速轉移至37°C水浴中。
2. **解凍**：在水浴中輕輕搖動凍存管，直到冰wan全融化。
3. **去除凍存液**：將細胞懸液轉移到含有wan全培養基的離心管中，輕輕混合。
4. **離心**：通常以低速（約100-200g）離心5-10分鐘，以沉淀細胞。
5. **去除上清**：小心去除上清液，避免擾動細胞沉淀。
6. **重懸和接種**：將細胞重懸于適量的wan全培養基中，轉移到培養容器中進行培養。
### 注意事項
- **無菌操作**：整個過程需在無菌條件下進行，避免污染。
- **凍存液的選擇**：不同細胞類型可能需要不同的凍存液配方。
- **細胞密度**：凍存時細胞密度不宜過高，以免影響復蘇后的細胞活性。
- **解凍速度**：快速解凍有助于減少細胞損傷。
- **復蘇后的監測**：復蘇后需檢查細胞生長狀態和污染情況。
細胞凍存和復蘇的成功與否直接關系到細胞系的質量和長期使用的可行性，因此這些操作需要嚴格遵循標準操作程序（SOP）。